会，但是不建议洗掉。因为最后显色是依赖于膜上结合的二抗，二抗带有酶标记，通过酶与化学发光底物反应，产生信号，从而曝光可得结果。如果不做下一步，酶或者膜上如果洗不掉，可以尝试升温(不超过45度)和延长洗膜时间(不超过45分钟)。需要强调一点：强效的Stripping buffer,能把上一轮的染色条带洗得比较干净，但蛋白样本的
?﹏? 洗膜大概洗多长时间？有一个目的蛋白和GAPDH的分子量重合，用膜再生液室温洗1h都没有把抗体洗掉，按照说明书用50度水浴洗之后好像是把抗原也洗掉了，显影无条带，有1。洗的时间过长对膜上蛋白影响不大，对有些抗体还是有影响的，我有过类似的经历，确实可以洗掉一部分抗体。2。actin都做出来了，转膜明显是没问题的。ero11 (2013-10-15 11:13
最有可能的是因为一抗浓度太高，作用时间太长引起的。另外洗一抗和洗二抗千万不要偷工减漏，建议5min*5次，不要但是洗这么多次就把抗体和蛋白洗掉了，你又不是拿刀在上面刮，真正的抗原抗而且因为抗原结合是相对较弱的，因此很容易被洗掉。一般我们实验室用的方法是直接用Washing buffer(1X TBST)反复洗3-4h甚至更长时间，中间更换1-2次TBST,这种方法
可能原因：膜或者缓冲液被污染；封闭不充分；检测时曝光时间过长；抗体浓度过高或者抗体与封闭液之间有交叉反应。3.条带信号很弱可能原因：洗膜过度；抗体保存不当或蛋白含量太低不充足- :[答案] 大致上看时间不显得太长，我常常使用30V18小时. 但是具体问题具体分析，如果你的目标蛋白分子量很小，你的膜孔径大，你的转膜缓冲液条件使得蛋白移动快或
做预实验避免；还有容易发生的是一抗浓度太高，作用时间太长引起的，品牌一抗都有稀释比例建议；再个质量好的一抗直接37 度孵育半小时就好，无需孵育过夜；再强调一reyesa 发布于2013-10-21 02:18IP江苏这样的条件不太会把蛋白洗掉。但可能会把抗体洗掉。一抗二抗
