＞▂＜ 杂交(变性探针)一洗膜一放射自显影或显色(二)Northern Blot 原理：在变性条件下将待检的RNA 样品进行琼脂糖凝胶屯泳，继而按照同Southern Blot 相同的southern blot杂交服务(基于DIG地高辛标记探针)实验案例基因组DNA提取实验实例我们提取基因组DNA,品质需达到以下标准：纯度：OD260/OD280=1.8-2.0 浓度≥50ng/ul 质量≥10ug
转膜结果中只有阳性对照组有杂交后显色，可能原因有：①本实验采用毛细管法向上转移，可能是由于转膜速度慢、效率低导致的转膜不完全，使DNA含量非常少，以至于无法抗-DIG-碱性磷——Southern 印迹杂交验证应包括适宜的阳性和阴性对照。应说明所使用探针的长度、位置，琼脂糖凝胶中DNA 的上样量及印迹前的凝胶图像。阳性对照的浓度应为
在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题：转膜必需充分，要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背southern杂交的阳性对照浓度是特定序列定位的通用方法。根据查询相关公开信息显示，因为southern杂交的阳性对照浓度是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。利用
Southern对DNA的质量要求比较高，一般来说，高质量DNA 样品需具备以下几点：① DNA 完整性好；② DNA 纯度高；③ 勿用TE 溶解DNA;④ DNA 浓度不低于0.7ug/ul,杂交需该法的优点是快速，在30分钟内就能从正常厚度(4-5mm)和正常琼脂糖浓度(<1%)的凝胶中定量地转移出来。转移后得到的杂交信号比Southern转移强2-3倍。缺点是如不小
