转膜时间太长，小蛋白会不会从膜中穿过发生“blowthrough”的现象。pvdf膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。2.pvdf膜35、在做WB时，PVDF膜用甲醇浸泡的目的？答：PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。36、
取出PVDF 膜并用去离子水略为漂洗，用甲醇浸泡数秒钟，然后进行染色；8、膜染色：考马斯亮蓝染色(将0.1%考马斯亮蓝R-250 溶于40%甲醇/1%乙酸中)30-50 秒(切勿超过1 分钟),用甲醇活化不能超过15秒，时间太久会对pvdf膜造成损伤。找一个平皿，倒入一定体积的纯甲醇，用镊子夹着膜边角在纯甲醇里漂一下，见到膜由不透明变为均一的半透明，
min,3次，操作时手不要乱触碰别的地方，避免污染，不然会产生背景脏🤲封闭部分封闭液要确保完全盖过膜，不能漏掉任何一个小角落，避免气泡❣️🤲转印部分20 kDa以下蛋白选用0.2 μm PVDFPVDF本质是一种疏水性的聚合物，在水溶液中不会浸湿。为了在水性缓冲液和系统中使用PVDF膜，首先必须将其浸泡在50%(v/v)或更高浓度的醇溶液中。甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜
ˋωˊ PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润（不超过15s），去离子水浸润7、PVDF膜染色前处理：取出PVDF膜并用去离子水略为漂洗，用甲醇浸泡数秒钟，然后进行染色；8、膜染色：考马斯亮蓝染色(将%考马斯亮蓝R-250溶于40%甲醇/1%乙酸中)30-50秒(切勿超过
↓。υ。↓ 。PVDF膜先在甲醇中浸泡激活约20 sec,然后与滤纸一起放入电转液中平衡10 min。打开凝胶夹，以黑色板为阴极，从黑色板向上依次放入海绵、3张滤纸、凝胶、PVDF膜、PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润（不超过15s），去离子水浸润
