后者可增加标本上样量至少每孔20-30ug蛋白，样本制备时使用蛋白酶抑制剂，或分级提取目，,5、转膜不充分，或洗膜过度使用丽春红S检测转膜效果，PVDF膜需浸透，需正确的转膜操作，勿过度答：你可以加大上样量，没有问题，还有转移时你可以减少电流延长时间，加20%甲醇；还有一种办法就是采用最新的WES来检测，灵敏度极高，但价格贵。21、想分离的蛋白是
不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润（不超过15s），去离子水浸润5min，再用转移缓冲液平衡10min1. 印迹中的气泡问题：转移“三明治”组装不恰当解决办法：在组装转移“三明治”的时候使用更多的转印缓冲液；确保在组装“三明治”的时候移除凝胶和印迹膜之间所有的气泡；在抗体孵育
◇ 转膜液中甲醇含量可适当降低，推荐使用湿装转膜效率更高哦。第11问：我做的蛋白质分子量很小(10KDa),请问怎么做WB? ◇ 可以选择PSQ 膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起膜干了以后可以通过浸泡甲醇恢复，转膜过程发生干膜也可以这样，但是会对结果有一定影响。就像楼上说的，孵育过抗体再晾干就不能strip了，一般stripping 试剂盒说明书
4、我做的蛋白质分子量很小(10KD),请问怎么做WB? 答：可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。其他按步骤即可。5、我的目的带很弱，怎么加强？答：发布于2007-06-22 11:47IP上海谢谢，用的是PVDF膜，已经压片了，没觉得有什么影响，谢谢！回复点
（°ο°） 如果这个算正反面的话，那么就是有正反面的。但是对于WB来说在转膜前是没有正反面之分的。你用粗糙的面贴着胶转膜和光滑的面贴着胶转膜，蛋白都能转到膜上去的。不答：可以考虑：转移缓冲液中加入20%甲醇(是指终浓度),因为甲醇可降低蛋白质洗脱效率，但可增加蛋白质和NC膜的结合能力，甲醇可以防止凝胶变形，甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间；转移
