甲醇可使PVDF膜上的电荷活化,使转膜更充分。而且,不用甲醇浸泡的PVDF很难被转膜缓冲液浸润。35、在做WesternBlot 时,PVDF 膜用甲醇浸泡的目的?答:PVDF 膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF 膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合,做小分子的蛋白转移时多加甲醇也
(1)pdvf 膜及滤纸的预处理:剪裁与胶大小一致的pvdf膜,将其浸入甲醇液中浸泡10 s(快速激活pdvf 膜),去离子水处理5min,1×转移缓冲液处理10min 以上。2)剪裁(1)PDVF 膜及滤纸的预处理:剪裁与胶大小一致的PVDF膜,将其浸入甲醇液中浸泡10 s(快速激活PDVF 膜),去离子水处理5min,1×转移缓冲液处理10min 以上。2)剪裁
2、甲醇浓度:CAPS电印迹缓冲液中甲醇浓度范围是0-20%(甲醇浓度高,用于低分子量蛋白转印;甲醇浓度低甚至不含甲醇的用于高分子量蛋白的转印); 3、PVDF膜处理:取出PVDF膜,用甲醇其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合。如果是小分子的蛋白转移时,
就重复性而言:尼龙膜可反复用于分子杂交,杂交后,探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。9. 在做Western Blot时,PVDF膜PVDF本质是一种疏水性的聚合物,在水溶液中不会浸湿。为了在水性缓冲液和系统中使用PVDF膜,首先必须将其浸泡在50%(v/v)或更高浓度的醇溶液中。甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜
(注:务必排尽凝胶和PVDF 膜之间的气泡。例如对70kD 以上的蛋白质须延长转移时间); 7、PVDF 膜染色前处理:取出PVDF 膜并用去离子水略为漂洗,用甲醇浸泡数秒钟,然后进行染其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合。如果是小分子的蛋白转移时,